Acerca de este curso
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Acerca de este curso
Domina la técnica de Western Blot para la detección y cuantificación de proteínas naturales y recombinantes, desde los fundamentos moleculares hasta el análisis digital de imágenes. Mediante una introducción y seis módulos en video basados en diapositivas guía, avanzarás desde la estructura de las proteínas y la preparación de muestras, pasando por la electroforesis y transferencia a membranas, hasta la inmunodetección, cuantificación y resolución de problemas comunes en el laboratorio.
Lo que aprenderás
- Comprender los principios fundamentales del Western Blot, incluyendo la estructura y propiedades de las proteínas, y conceptos básicos de inmunología como antígenos y anticuerpos.
- Aprender a preparar muestras biológicas mediante extracción, clarificación y cuantificación de proteínas, utilizando técnicas específicas según la fuente de la muestra (cultivos celulares, tejidos, microorganismos).
- Identificar y realizar correctamente los pasos de electroforesis de proteínas (SDS-PAGE, nativa, bidimensional) y transferencia a membranas (métodos húmedo, semiseco y seco).
- Aplicar métodos de detección inmunológica utilizando anticuerpos primarios y secundarios, explorando opciones de detección como quimioluminiscencia, fluorescencia y multiplexing.
- Desarrollar habilidades en el análisis de imágenes mediante programas especializados (ImageJ, ImageLab), interpretando resultados cualitativos y cuantitativos del Western Blot.
- Reconocer las aplicaciones prácticas del Western Blot en el análisis de proteínas recombinantes, inmunoproteómica y rutas metabólicas, y resolver problemas comunes en su implementación.
Estructura del curso
Introducción – Panorama general del Western Blot y su impacto en la investigación biomédica y biotecnológica.
Módulo 1. Introducción a las proteínas – Conceptos generales de las proteínas (estructura primaria, secundaria, terciaria, cuaternaria), conceptos básicos de inmunología (antígenos y anticuerpos, epítopes continuos y discontinuos), uso de herramientas bioinformáticas para la predicción de epítopes, ejercicio práctico de predicción usando servidores web y bases de datos.
Módulo 2. Preparación de muestras de proteínas – Métodos de extracción de proteínas según la fuente (cultivos celulares, tejidos animales o vegetales, microorganismos), clarificación y limpieza de muestras (eliminación de contaminantes como lípidos, polisacáridos y moléculas pequeñas), métodos de cuantificación de proteínas (absorbancia UV, Bradford, Lowry, BCA y Qubit®), ejercicio práctico de cuantificación.
Módulo 3. Electroforesis y transferencia de proteínas – Electroforesis de proteínas: SDS-PAGE, geles de poliacrilamida (tipos de geles, porcentajes, gradientes), tipos de electroforesis (nativa, desnaturalizante, isoelectroenfoque, bidimensional), métodos de tinción de geles (Coomassie, plata, Stain-Free y fluorescencia), transferencia de proteínas a membranas (métodos húmedo, semiseco y seco, tipos de membrana: nitrocelulosa vs. PVDF), verificación de la transferencia (Ponceau S, tinciones reversibles).
Módulo 4. Detección e inmunodetección – Bloqueo de membranas para evitar interacciones inespecíficas (BSA, leche descremada, gelatinas), uso de anticuerpos primarios y secundarios (criterios de selección, diluciones y optimización, anticuerpos monoclonales vs. policlonales), detección de proteínas recombinantes mediante etiquetas (His6, GST, MBP, Strep-Tag II), métodos de detección (quimioluminiscencia, fluorescencia, bioluminiscencia, colorimetría y multiplexing), eliminación de anticuerpos (stripping) y re-sondeo de membranas.
Módulo 5. Análisis e interpretación de resultados – Captura de imágenes y análisis digital (uso de programas como ImageJ, Image Studio Lite, ImageLab, ImageQuant), Western Blot cualitativo y cuantitativo (normalización con proteínas constitutivas vs. proteínas totales, sensibilidad del método, rango dinámico lineal, estabilidad de la señal), identificación y resolución de problemas comunes en Western Blot (ausencia de bandas, bandas inespecíficas, alto fondo, etc.).
Módulo 6. Aplicaciones y casos prácticos – Análisis de expresión de proteínas naturales y recombinantes, aplicaciones en inmunoproteómica y caracterización de proteínas en rutas metabólicas y de señalización, detección de interacciones proteína-proteína por inmunoprecipitación y Western Blot, prácticas guiadas para la ejecución completa del Western Blot, desde la preparación de muestras hasta la obtención de resultados.
Actividad integradora – Prepararás un informe completo de Western Blot que incluirá: diseño experimental (selección de anticuerpos, condiciones de electroforesis y transferencia), interpretación de resultados (análisis de bandas, normalización, cuantificación relativa), resolución de problemas simulados y un checklist de calidad del experimento.
Metodología y evaluación
Módulos asincrónicos en video con guías paso a paso, materiales descargables (diapositivas, papers científicos, protocolos), autoevaluaciones tipo reactivo al final de cada módulo y revisión del entregable final conforme a criterios definidos.
Herramientas
Se emplearán plataformas y utilitarios de uso libre y/o de código abierto para la predicción de epítopes (servidores web y bases de datos), cuantificación de proteínas (simuladores) y análisis de imágenes (ImageJ, Image Studio Lite). Adicionalmente, se revisarán equipos comerciales como ChemiDoc, iBright y sistemas de transferencia TurboBlot.
A quién va dirigido
Estudiantes, investigadores y profesionales de áreas como biotecnología, bioquímica, biología molecular, ciencias biomédicas, farmacología, microbiología, inmunología y biología general, así como a aquellos involucrados en disciplinas relacionadas como veterinaria, biotecnología industrial e ingeniería biomédica.
Requisitos previos
Conocimientos básicos de biología molecular (ADN, genes, proteínas) y manejo elemental de pipetas y equipos de laboratorio. No se requiere experiencia previa en Western Blot.
Duración y dedicación
Modalidad asincrónica — 15 horas
Certificación
Certificado de aprobación emitido por CEBIO ECUADOR con constancia de horas académicas, nombres completos, número de documento de identificación y código de trazabilidad.
Resultados de aprendizaje
Al finalizar, podrás:
- Proponer y justificar un diseño experimental de Western Blot para una proteína de interés (natural o recombinante).
- Preparar muestras proteicas desde diferentes fuentes biológicas y cuantificarlas adecuadamente.
- Ejecutar una electroforesis SDS-PAGE y transferir las proteínas a membranas con alta eficiencia.
- Seleccionar y optimizar anticuerpos primarios y secundarios, eligiendo el método de detección más adecuado.
- Analizar imágenes de Western Blot con software especializado, obteniendo resultados cualitativos y cuantitativos (normalizados).
- Diagnosticar y resolver problemas comunes en la técnica, documentando un reporte técnico listo para su ejecución en laboratorio.
