Acerca de este curso
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Acerca de este curso
Desarrolla un flujo de trabajo completo para la cuantificación de ácidos nucleicos mediante PCR en Tiempo Real (qPCR), desde el diseño experimental hasta el análisis de resultados. Mediante una introducción y cuatro módulos en video basados en diapositivas guía, avanzarás desde los fundamentos de la técnica y el diseño de primers y sondas, hasta la interpretación de curvas de amplificación, análisis de curvas de fusión y aplicaciones diagnósticas como la detección de SARS-CoV-2.
Lo que aprenderás
- Comprender los fundamentos teóricos y prácticos de la biología molecular aplicada al diagnóstico clínico mediante qPCR.
- Diseñar y ejecutar experimentos de qPCR con precisión y rigor científico, incluyendo el diseño de primers y sondas con software gratuito.
- Analizar e interpretar los resultados obtenidos en ensayos de qPCR para diferentes aplicaciones biomédicas.
- Identificar y aplicar buenas prácticas de laboratorio para garantizar la calidad y reproducibilidad de los experimentos.
- Desarrollar competencias para la detección de agentes patógenos, como SARS-CoV-2, mediante técnicas avanzadas de qPCR multiplex.
- Promover el pensamiento crítico y la resolución de problemas en el diseño e implementación de protocolos de qPCR.
Estructura del curso
Introducción – Panorama general de la qPCR y su impacto en el diagnóstico molecular.
Módulo 1. Fundamentos – Descripción general de la qPCR, componentes de la reacción, tecnologías de análisis, sistemas de detección de fluorescencia (SYBR Green y sondas TaqMan), análisis de curva de fusión, PCR multiplex en tiempo real, controles internos y genes de referencia.
Módulo 2. Diseño de experimentos – Tipos de ensayos de qPCR, consideraciones sobre el diseño de amplicones y primers, práctica de diseño de primers utilizando softwares gratuitos (Primer3, Beacon Designer, BLAST), consideraciones sobre la transcripción inversa (one-step vs. two-step), controles de reacción (NTC, No-RT) y métodos de normalización con genes de referencia (GAPDH, β-actina, 18S rRNA).
Módulo 3. Análisis de resultados – Cuantificación absoluta y comparativa (curvas estándar, eficiencia de reacción, método ΔΔCt), análisis de curva de fusión de alta resolución (HRM), análisis de PCR multiplex en tiempo real, aplicaciones de la PCR en tiempo real (cuantificación de expresión génica, discriminación alélica, detección de patógenos, cuantificación de carga viral).
Módulo 4. Detección de SARS-CoV-2 mediante ensayo de PCR múltiplex – Introducción a la amplificación PCR múltiplex, diseño de cebadores y sondas, selección de regiones genómicas objetivo (genes N, E, RdRp), consideraciones para evitar la formación de dímeros y productos no específicos, preparación de muestras clínicas, configuración de la reacción de PCR múltiplex, selección de enzimas y reactivos, consideraciones y desafíos en la amplificación PCR múltiplex.
Actividad integradora – Prepararás un reporte de análisis qPCR que incluirá: selección de primers diseñados con software especializado, interpretación de curvas de amplificación y fusión, cálculo de eficiencia de reacción y cuantificación de una muestra problema (absoluta o relativa según el caso), más un checklist de calidad del diseño experimental.
Metodología y evaluación
Módulos asincrónicos en video con guías paso a paso, materiales descargables (diapositivas, papers científicos, protocolos), autoevaluaciones tipo reactivo al final de cada módulo y revisión del entregable final conforme a criterios definidos.
Herramientas
Se emplearán plataformas y utilitarios de uso libre y/o de código abierto para el diseño de primers (Primer3, Beacon Designer), búsqueda de similitudes (NCBI BLAST) y análisis de especificidad (AutoDimer, Multiple Primer Analyzer). Opcionalmente se trabajará con laboratorios virtuales como Cibertorio para simulación de detección de SARS-CoV-2.
A quién va dirigido
Estudiantes y profesionales de Biotecnología, Microbiología y Biología Molecular que buscan estandarizar un pipeline de diseño experimental, amplificación y análisis de resultados en qPCR para diagnóstico clínico e investigación biomédica.
Requisitos previos
Conocimientos básicos de biología molecular (ADN, genes, PCR, transcripción inversa) y manejo elemental de formatos de secuencia (FASTA).
Duración y dedicación
Modalidad asincrónica — 12 horas académicas
Certificación
Certificado de aprobación emitido por CEBIO ECUADOR, con constancia de horas académicas, nombres completos, número de documento de identificación y código de trazabilidad.
Resultados de aprendizaje
Al finalizar, podrás:
- Proponer y justificar un diseño experimental de qPCR para un microorganismo o gen de interés.
- Diseñar primers y sondas respaldados por análisis in silico (Tm, especificidad, ausencia de dímeros).
- Configurar correctamente una reacción de qPCR (singleplex o multiplex) e interpretar curvas de amplificación, estándar y fusión.
- Definir criterios de éxito (eficiencia, R², pendiente, controles) para validar un ensayo de qPCR.
- Entregar un reporte técnico con análisis de cuantificación absoluta o relativa, listo para su eventual ejecución en laboratorio.
